• 产品名称:原子力显微镜近场光学显微镜系统与荧光寿命成
  • 品        牌:
  • 产        地:
  • 发布时间: 2019-08-13
产品详细

  自从二十世纪九十年代早期现正在仍然广为人知的共焦和双光子激光扫描显微镜赢得成像方面打破性的开展之后,共焦和双光子激光扫描显微镜所特有的众光子胀舞、光学切片以及超高的比拟度使得其成为了生物样品荧光成像的理思拔取。

  有机分子的荧光不光仅能够用其胀舞光谱来特性识别,还能够通过荧光寿命来特性识别。荧光寿命受到胀舞态分子和其边际境遇之间任何可意料的能量变动城市影响荧光寿命。鉴于荧光寿命与浓度无闭,所以发色团的荧光寿命丈量是一种直接斟酌一共涉及能量变动流程的格式。范例的斟酌示例蕴涵斟酌面阵区域上的细胞参数,例如pH,离子浓度,通过荧光淬灭来斟酌氧饱和,或者是细胞内差别发色团的荧光能量变动。

  尽量共焦FLIM供给了样品许众的化学消息,然则它的空间离别率依然受到了衍射极限的局限。所以科研就业家需求找到一种可能能够和FLIM本领维系起来的高离别显微本领。而原子力显微镜(AFM)即是如许的一种本领,它能够正在纳米标准上搜聚生物或者无机样品的形色。AFM有若干种操作形式,接触、轻触或者非接触。AFM正在生物样品上繁荣的最为成熟的一种形式是轻触形式:探针以其固有的频率振撼,看待柔弱的生物样品施加很小的力来获得高精度的形色特性。AFM维系荧光寿命能够获得无标识的电、磁和呆板消息,能够用来深刻的斟酌样品。

  该编制以AFM轻触形式就业。荧光通过显微镜透镜采集和聚焦到一个共焦针孔里。透过针孔的荧光通过一个内置于NTEGRA optics的单色仪分光,并投射正在FLIM检测器上。咱们会行使NTEGRA编制一个卓殊的AFM探针装备,这个装备的上风正在于能够用来斟酌不透后的样品。其它,除了样品扫描以外它还能够用来履行光束扫描,这是共定位丈量和加强拉曼散射斟酌特殊需求的成效。

  看待AFM和FLIM成像,咱们会把样品就寝正在一个三维压电平台上(如图1右所示),用来确保AFM的探针和样品外貌的隔断恒定和对x,y对象实行光栅扫描。压电平台正在二维对象的转移隔断是120m,Z轴上的转移隔断为10m。试验中一共采集到的图像都是由覆有TiN的硅AFM旋臂通过轻触形式采集到的,旋臂的长度为125m。探针的力常数为5.1N/m,能够兼容生物体的成像,共振频率为160 kHz。

  BDL SMN二极管激光器形成50ps脉冲长度的488nm波长激光,反复率能够是80,50或者20MHz。激光具有束流剖面校正和 Qioptiq 型单模光纤相连器。输入到光纤的激光功率是2mW,反复频率是80MHz。倘若加大脉冲岁月的话还能够获得更高的功率。

  Simple-Tau 150编制含有一个包罗总线扩展电缆和扩展盒的条记本。扩展盒里有bh SPC-150 TCSPC/FLIM模块和DCC-100探测器节制器。HPM-100探测器蕴涵一个滨松R10467-40搀杂型PMT管,一个用于形成就业电压的高压发作器和一个GHz的带宽低噪声前置放大器。探测器的探测效能为50%,能够正在脉冲之后探测。看待FLIM装备这是很好的光子效能:到达指定所需求的光子数很切近理思值。

  SPC-150 TCSPC卡的荧光寿命成像是基于一个众通道的TCSPC流程,所有道理如图4左所示。TCSPC模块几首来自于探测器的单光子脉冲,来自激光的岁月参考脉冲,以及来自于Nanonics编制压电节制器的同步脉冲输出(帧初步,线初步,像素初步)。看待每一个光子,TCSPC编制城市确定它正在激光脉冲周期内的岁月,t,以及扫描区域内的地方(x,y或者AFM探针)。通过这些消息,TCPSC编制能够设置具有x,y和t的光子分散。如许的分散包罗通过包罗一个激光脉冲周期内的完全荧光衰减弧线(t)的像素聚拢(x,y)。这个轨范的上风正在于它正在每个像素点记载了一个完全的荧光衰减弧线,而不光仅是一个荧光寿命。其它,它还具有切近完善的光子效能,能够行使随意的扫描速度。正在激光扫描显微镜内(扫描速度为10

  像素点每秒),搜聚获得的数据量很大。而正在慢速扫描流程中,每秒的数据恐怕惟有一帧。遵照推论,倘若积分岁月和探测的速度是相仿的,扫描速度和结果也是独立的。

  和64位SPCM 数据搜聚软件联用的SPC-150模块能够记载的图像像素巨细到达了百万级。如许FLIM编制所记载的像素量级就和AFM中常用的像素量级相当。同时行使256, 1024和4096个岁月通道可能到达的离别率为2048 x 2048,1024 x 1024和512 x 512。当NSOM的衰减数据包罗很疾和很慢如许衰减速度差别很大的组分时,众岁月通道的上风就展现出来了。

  一共的数据都是依据上文描叙的道理记载的,正在SPCM数据搜聚软件的FIFO Imaging形式内部搜聚,行使的数据领悟软件是SPCImage。FLIM数据与AFM数据的联用来自于NT-MDT的NOVA软件。

  咱们用EGFP和phiYFPv转染大肠杆菌,将细胞悬浮液重积正在载玻片上并干燥。咱们分离观测了高度和相位(未列出)的图像,行使的软件是NOVA。图4A是较为辘集的大肠杆菌的形色(512x512 pixels),总的扫描鸿沟为40x40m。图4B到D显示了4x4m巨细的同样的数据。图4C是FLIM数据,图4D是FLIM数据和形色数据的总和。图5是图4C中一个5x5像素点的荧光衰减函数。

  图4,用EGFP和phiYFPv转染的大肠杆菌,A:巨细为40x40m的AFM数据,B:巨细为4x4m的AFM数据,C,巨细为4x4m的NOSM FLIM数据,颜色是荧光寿命,亮度是荧光强度,D:FLIM数据和形色数据的总和,颜色代外荧光寿命,亮度代外高度。

  倘若AFM/NSOM的编制能够供给一个来自于压电平台的同步脉冲信号,一个来自于脉冲激光的光学输出,以及来自于光子计数探测器的光学输出,那么它能够很方便的与FLIM编制联用。而这些需求都能够被NT-MDT NTEGRA编制很方便的知足。咱们用一个bh的Simple-Tau 150 TCSPC FLIM编制,一个bh BDL-SMN皮秒二极管激光器,一个bh PMH-100-40搀杂型探测器设置起来的FLIM编制与NTEGRA编制联用。AFM FLIM编制的上风正在于能够同时获得高离别率的形色数据和荧光寿命数据。如许的数据能够把形色以亮度和荧光寿命以颜色的式样来一同显现。咱们运用这项本领斟酌了大肠杆菌、HEK细胞和共混集中物。这项本领源委鼎新之后还能够与荧光/磷光寿命成像、众波长激收复用、众波长探测以及NIR探测。

  • 友情链接:
  • 联系人:吴先生 手机:13929401087 电话:0769-85335758 传真: 0769-82788046 E-mail:admin@studiobeautyhk.com 网站地图
  • 333彩票【m693.com】拥有亚洲娱乐游戏合法牌照,我们为您提供333彩票,333彩票下载,333彩票平台,333彩票手机app,333彩票app,彩票333安卓版,系统安全,充值提速,操作简单,方便实用。